RNA dot blot斑点杂交实验原理，步骤和设备

RNA dot blot（RNA 斑点杂交）是一种基于核酸杂交原理的分子生物学技术，由Southern blot（DNA 杂交）衍生而来，主要用于定性或半定量检测样本中特定RNA的存在及相对丰度。与传统Northern Blot相比，RNA dot blot斑点杂交实验无需电泳分离RNA，直接将样本点样于膜上进行杂交，操作更简便、通量更高，常用于快速筛查大量样本或检测已知序列的RNA分子。

RNA dot blot斑点杂交实验原理

RNA Dot Blot的核心原理是核酸分子杂交。利用碱基互补配对原则，将标记的核酸探针（DNA或RNA）与固定在膜上的目标RNA序列杂交，通过检测探针的信号（如放射性、荧光或化学发光）来判断目标RNA的存在及含量。样本中的RNA无需经过电泳分离，直接通过点样仪或手动点样到固相膜（如尼龙膜、硝酸纤维素膜）上，经紫外交联仪固定后与探针杂交，因此称为“斑点杂交”。

RNA dot blot斑点杂交实验步骤

在进行RNA dot blot斑点杂交实验时，可参考以下步骤：

1. 样本RNA提取：从细胞、组织或体液中提取总RNA，通过分光光度计和琼脂糖凝胶电泳（观察条带）评估RNA纯度和完整性。

2. 点样至膜上：用移液器将RNA样本（稀释至合适浓度）直接点在膜上，形成直径约2~3 mm的斑点，注意设置阴性（水）和阳性（已知含目标RNA的样本）对照。也可以使用点样仪进行高通量点样。

3. 固定RNA：将膜置于紫外交联仪XEPU-1208中，通过紫外线使RNA与膜上的氨基或醛基共价结合，增强稳定性。

4. 探针杂交：将标记探针加入杂交液，与膜在42~65℃孵育过夜（12~16小时），使探针与目标RNA互补配对。

5. 洗膜：用不同浓度的盐溶液和去污剂（SDS）逐步洗去非特异性结合的探针，保留特异性杂交的探针。

6. 信号检测与分析：根据探针标记类型，通过放射自显影、化学发光或显色反应检测杂交信号。

RNA dot blot斑点杂交所需设备

1. 核酸提取仪器（如离心机、恒温振荡器）

2. 点样装置

3. 杂交炉

4. 紫外交联仪XEPU-1208

5. 洗膜设备（摇床或洗膜槽）

6. 信号检测设备（如放射自显影暗盒、化学发光成像系统）

下图：RNA dot blot斑点杂交实验用紫外交联仪（型号XEPU-1208）  紫外交联仪产品详情

紫外交联仪XEPU-1208可快速将RNA固定在杂交膜上，且杂交信号远高于传统烘烤法！紫外交联仪XEPU-1208操作简单，照射剂量精准可控，内部紫外线辐照均匀，是RNA dot blot斑点杂交实验的理想设备！

RNA dot blot斑点杂交所需试剂

RNA dot blot斑点杂交实验需要用到的试剂有RNA提取试剂、点样缓冲液、杂交缓冲液、标记探针、洗膜缓冲液（不同浓度的SSC和SDS溶液）、检测试剂（如同位素显影液、化学发光底物）。

RNA dot blot斑点杂交实验应用

• RNA dot blot斑点杂交实验可用于基因表达分析：快速检测不同组织、细胞或处理条件下目标基因的RNA表达水平。

• RNA dot blot斑点杂交实验可用于病毒RNA检测：用于病毒感染样本中病毒RNA的定性筛查。

• RNA dot blot斑点杂交实验可用于转录本定量：结合标准品可半定量分析RNA浓度，尤其适用于批量样本的初步筛选。

• RNA dot blot斑点杂交实验可用于突变或多态性研究：通过探针特异性杂交检测RNA序列变异。

RNA dot blot斑点杂交实验操作简便、高通量，适合大量样本的初筛或已知基因的表达分析。上海析浦专业生产RNA dot blot斑点杂交用紫外交联仪，欢迎联系我们，了解紫外交联仪详情！