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观察AAV转染小鼠的荧光显微镜适配光源

发布时间:2024-04-09 13:17:09 人气:144 来源:析浦(上海)科学仪器

腺相关病毒AAV

腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)是目前发现结构最简单的、无包膜的单链DNA病毒,病毒基因组长约有4.7Kb,属于细小病毒家族。腺相关病毒(AAV)因其能长期表达、毒性低、免疫原性低、组织特异性高等优势,已成为基因治疗领域最重要的基因载体之一。

北京大学第三眼科的胡双和杨丽萍在2020年发表的文献“不同血清型腺相关病毒载体转染小鼠视网膜后的表达效率”中,以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)作为标记, 观察不同AAV血清型载体介导的视网膜基因表达。实验中,选取视网膜疾病基因治疗中常用的AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8和AAV2/9四种血清型AAV载体,并以绿色荧光蛋白作为报告基因,用GFP的表达强度判断AAV载体介导的外源基因在视网膜中的表达效率。实验结果表明,AAV2/8和AAV2/9在小鼠视网膜的GFP绿色荧光明显,说明这两种AAV载体转染小鼠视网膜后的表达效率高,而在这两种血清型中,AAV2/8的GFP绿色荧光主要集中在感光细胞内,AAV2/9在视网膜全层均有表达,说明AAV2/8对视网膜感光细胞特异性更强。详见下图:小鼠视网膜下腔注射不同血清型AAV病毒载体后2周的免疫荧光染色 Expression of GFP reporter gene in different AAV serotype in mouse retina.

小鼠视网膜下腔注射不同血清型AAV病毒载体后2周的免疫gfp荧光染色

观察AAV转染小鼠的GFP荧光

野生型绿色荧光蛋白GFP有两个激发光峰值,分别在395nm(长波紫外线UV-A)和475nm(蓝光)。观察AAV转染小鼠的GFP绿色荧光时,一个经济便携的方式是为现有的体视显微镜增加一个外部激发光,可替代昂贵的荧光显微镜,用于GFP荧光观察。

GFP荧光手电筒GFPfinder-2101RB可搭配支架,适配各种型号的体视显微镜,作为一个外部激发光,用于激发观察AAV转染小鼠的GFP绿色荧光。

下图:适配体视显微镜的GFP荧光手电筒GFPfinder-2101RB

适配体视显微镜的GFP荧光手电筒GFPfinder-2101RB


Reference: Hu S, Yang LP. [Expression pattern of different serotypes of adeno-associated viral vectors in mouse retina]. Beijing Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2020 Oct 18;52(5):845-850. Chinese. doi: 10.19723/j.issn.1671-167X.2020.05.008. PMID: 33047717; PMCID: PMC7653430.

标签:荧光手电筒, 激发光源, 荧光蛋白,
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