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GFP荧光激发光源的原理

发布时间:2023-06-15 11:13:18 人气:259 来源:析浦科学仪器

GFP绿色荧光蛋白激发原理

绿色荧光蛋白GFP是个被发现的荧光蛋白,来源于水母Aequorea victoria。GFP分子量约为27kDa,是一个由238个氨基酸组成的单链多肽。更大激发波长395nm,发射峰509nm,并且在470nm处有一个肩峰。其化学性质稳定,作为荧光标记广泛应用于生物医学研究。

其发色团由65至67位的三个氨基酸(Ser-Tyr-Gly)残基组成,包裹在一个β折叠形成的桶装结构中。当蛋白质链折叠时,这段被深埋在蛋白质内部的氨基酸片段经环化,脱水形成咪唑酮。在分子氧存在的条件下,发色团可进一步发生氧化脱氢,最终形成荧光。简单来讲,66位酪氨酸的六元苯环与蛋白质主链环化形成的双环共轭结构可以发光。395nm(紫外)和475nm(蓝光)是绿色荧光蛋白两个更大激发波长,使用其中的一种激发光源激发GFP,就可使其发出绿光(发射波长在509nm)。推荐使用荧光手电筒XEPU-2101GFP来观察GFP的表达。

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GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素强,特别是在450~490nm蓝光波长下更稳定。类似的,GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白,比如荧光蛋白的应用非常的广泛(如上图),  已经应用于分子标记,体内示踪,信号转导,药物筛选等生物科研的各个方面荧光让我们能够检测分子的构象变化,也能让我们追踪化学反应.... 是科学研究的重要手段之一。与荧光相似,生物发光也常用在实验室中。与荧光不同,生物发光不需要激发光照射。

GFP荧光激发光源

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