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GFP激发光源照不出GFP荧光的原因

发布时间:2023-11-01 10:47:38 人气:286 来源:析浦科学仪器

GFP是绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein)的缩写,是科学实验室基因编辑研究的一种常用报告基因,广泛应用于生物学研究中。析浦的GFPfinder-2101便携式GFP激发光源被广泛用于检测GFP的表达。如果使用GFP激发光源照不出GFP 荧光,可能有以下几个原因:

1. 激发光源选型问题:确保使用的激发光源能够激发GFP的荧光,常用的 GFP激发光源波长有紫外365nm波段和450-490nm的蓝光波段。如果是wtGFP或avGFP,建议选用析浦的GFPfinder-2101UV紫外激发光源,如果是增强型绿色荧光蛋白,建议选用析浦的GFPfinder-2101RB蓝色激发光源。如果激发光源的波长不正确或者强度不够,可能无法激发GFP荧光。

2. GFP表达问题:确保目标细胞或组织中成功表达了GFP。如果GFP没有正确表达或者表达量过低,可能导致无法检测到荧光。

3. 细胞状态问题:细胞的状态也可能影响 GFP 的荧光强度。如果细胞处于凋亡、坏死或者过度处理等状态,可能导致 GFP 荧光减弱或消失。

4. 荧光淬灭问题:某些因素可能导致 GFP 荧光淬灭,例如光照过强、溶液中的pH值等。尝试调整实验条件以减少荧光淬灭的影响。

5. 荧光观察眼镜问题:确保仪器的波段选择正确,包括激发波长、发射波长、增益等参数。如果选择不匹配的荧光观察眼镜,可能无法检测到 GFP 荧光,部分厂家提供的观察眼镜和GFP激发光源不匹配,造成荧光观察眼镜过多的过滤掉了GFP的荧光,或者激发光截止深度不够,造成视野过多的激发光,严重干扰了GFP荧光。

如果以上方法都无法解决问题,建议尝试使用荧光显微镜来检测GFP荧光或更换不同波段的激发光源等。同时,也可以咨询析浦科学仪器的技术工程师,以获取更多的建议和帮助。


GFP在烟草叶片的表达

上图:GFP在烟草叶片的表达

GFP 的激发光源主要类型:

1. 紫外线光源:紫外线光源是常用的 GFP 激发光源之一,可以通过紫外线激发 GFP 荧光。紫外线光源通常使用大功率紫外线led光源,通过滤光片或光栅等光学元件过滤出特定波长的紫外线,然后照射到 GFP标记的样本上,激发 GFP发出绿色荧光,常用的型号有GFPfinder-2101uv。

2. 蓝光光源:蓝光光源也是常用的 GFP 激发光源之一,可以通过蓝光激发 GFP 荧光。蓝光光源通常使用蓝色LED模组为光源,通过滤光片或光栅等光学元件过滤出特定波长的蓝光,然后照射到 GFP 标记的样本上,激发 GFP绿色荧光,常用的型号有GFPfinder-2101RB。

3. 白光光源:白光光源也可以用于 GFP荧光的激发,但其激发效率相对较低。白光光源通常使用氙灯作为光源,通过滤光片或光栅等光学元件过滤出特定波长的光,然后照射到 GFP 标记的样本上,激发 GFP 荧光,因此光源的激发效率低,这种类型的激发光源不推荐。

以上是常用的 GFP 激发光源类型,不同类型的激发光源具有不同的特点和应用领域,需要根据具体需求和实验条件来选择合适的GFP激发光源。

GFP在烟草叶片的表达

上图:GFP在烟草叶片的表达

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标签:荧光手电筒, 激发光源, 荧光蛋白,
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